Среды для заключения препаратов

Среда для заливки и замораживания OCT (Optimal Cutting Temperature Compound) — это специализированная водорастворимая матрица, используемая для подготовки высококачественных замороженных гистологических срезов. OCT надёжно обволакивает биоптат, обеспечивая механическую поддержку, улучшая целостность структуры и позволяя получать тонкие, равномерные срезы без деформаций.

Характеристики среды

• Объём, мл — 110;
• состав — водорастворимая смесь полиэтиленгликоля и поливинилового спирта;
• назначение — матрица для замораживания и срезания тканей;
• условия хранения — при комнатной температуре;
• срок годности — 24 месяца;
• совместимость — подходит для последующих гистохимических и иммуногистохимических окрасок.

В отличие от парафина или других несмываемых сред, OCT не требует сложной депарафинизации и совместим с широким спектром методов анализа, включая флуоресцентную микроскопию и экспрессию антигенов. Для получения оптимальных результатов рекомендуется предварительно выдержать ткань при -20 °C перед заморозкой в OCT, а фиксированные образцы — провести через градиент сахарозы для предотвращения образования кристаллов льда.

После срезания и переноса препарата на предметное стекло избыток OCT легко удаляется промывкой в воде или буфере, поскольку состав полностью водорастворим. Это исключает остаточное фоновое окрашивание при последующих гистологических или иммуногистохимических реакциях, что особенно важно для чувствительных методов детекции.

Монтирующая среда используется для заключения гистологических препаратов между покровным и предметным стеклами. Препятствует высыханию препарата, сохраняя его первоначальную структуру в течение длительного времени (много лет), а также уменьшает скорость затухания флуоресценции флуоресцентных красителей, если такие используются при окрашивании гистологического препарата.

Состав набора: раствор, готовый к применению, во флаконе.

Фасовка: 10 мл, 25 мл.

Срок годности: 12 месяцев.

Монтирующая среда с защитой от выцветания флуоресценции — это специализированный герметизирующий реагент, предназначенный для длительного сохранения флуоресцентного сигнала в гистологических и цитологических препаратах. При наблюдении под флуоресцентным микроскопом большинство красителей постепенно теряют интенсивность из-за фотобелинга — процесса разрушения флуорохрома под действием возбуждающего света. Данная среда содержит высокоэффективные антифейд-добавки, которые значительно замедляют этот процесс и позволяют максимально продлить время визуализации и документирования образцов.

Характеристики среды

• Объём, мл — 25;
• основа — высокочистый глицерин;
• действие — замедление фотобелинга флуорохромов;
• условия хранения — при –20 °С в темноте;
• срок годности — 12 месяцев;
• условия транспортировки — на «мокром» льду.

Часто в лабораторной практике используют самодельные монтажные среды на основе глицерина или других растворителей, однако их состав редко стандартизирован, а эффективность защиты от выцветания может сильно варьироваться от партии к партии. Это особенно критично при проведении количественного анализа или при необходимости повторного просмотра слайдов. Кроме того, приготовление таких сред вручную требует времени и дополнительных ресурсов. Для лабораторий, где важна воспроизводимость результатов и стабильность флуоресцентного сигнала (например, в исследованиях экспрессии белков, ко-локализации или при работе с редкими образцами), мы рекомендуем использовать готовую монтирующую среду на основе высокочистого глицерина с проверенными антифейд-компонентами. Также этот продукт идеально подойдёт для небольших лабораторий или учебных центров, где нет необходимости готовить большие объёмы реагентов — достаточно нанести одну каплю на препарат и аккуратно накрыть покровным стеклом.

Важно: даже при использовании антифейд-среды зафиксированные слайды следует хранить при +4 °С в темноте (предпочтительно в тёмной коробке для микропрепаратов) и проводить микроскопию с фотографированием как можно скорее после герметизации. При работе с реагентом обязательно используйте лабораторный халат и одноразовые перчатки.

Монтирующая среда с защитой от выцветания флуоресценции — это готовый водный реагент для фиксации микропрепаратов, предназначенный для одновременного окрашивания ядер и сохранения флуоресцентного сигнала в клетках и тканях. DAPI— это проникающий сквозь мембрану сине-флуоресцентный краситель, который избирательно связывается с двухцепочечной ДНК, после связывания интенсивность флуоресценции возрастает более чем в 20 раз, при этом краситель не взаимодействует с одноцепочечной ДНК. Экспозиционные максимумы: возбуждение — 364 нм, эмиссия — 454 нм (в комплексе с ДНК).

Характеристики среды

• Объём, мл — 25;
• тип — водная монтирующая среда с антифейд-эффектом;
• содержит DAPI — да;
• условия хранения — при –20 °С в темноте;
• срок годности — 12 месяцев.

Традиционно окрашивание ядер и герметизацию препарата выполняют в два отдельных этапа, что увеличивает время подготовки образца и риск повреждения флуоресцентного сигнала. Кроме того, без специальных антифейд-добавок флуорохромы быстро теряют яркость под воздействием света, особенно при длительном хранении или повторных просмотрах. В некоторых лабораториях для продления флуоресценции используют самодельные монтажные среды, однако их состав может быть нестабильным, а эффективность — непредсказуемой.

Для обеспечения воспроизводимости результатов, экономии времени и максимальной сохранности сигнала мы рекомендуем использовать готовую монтажную среду с DAPI. Особенно она подойдёт для лабораторий, где важна стандартизация протоколов (например, в исследованиях, связанных с количественной флуоресцентной микроскопией), а также для небольших исследовательских групп, которым нецелесообразно готовить реагенты вручную. Достаточно нанести одну каплю средства на образец и накрыть покровным стеклом — ядерное окрашивание и герметизация завершены за один шаг.

Важно: после вскрытия препарат следует хранить при +4 °С в темноте (рекомендуется использовать тёмную коробку для слайдов).

LumiMount — это готовая к использованию монтирующая среда на водной основе, предназначенная для надёжной герметизации флуоресцентно меченых клеточных и тканевых препаратов перед микроскопией. Среда содержит специальные компоненты, замедляющие фотобелинг флуорохромов, что позволяет сохранять яркость сигнала в течение всего сеанса визуализации и при повторных просмотрах.

Среда обеспечивает стабильные результаты за счёт стандартизированной формулы. После нанесения под покровное стекло среда постепенно концентрируется за счёт испарения воды, и её коэффициент преломления возрастает до 1,46 — значения, близкого к оптическим характеристикам стекла. Это улучшает качество изображения и повышает разрешающую способность при флуоресцентной микроскопии.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• коэффициент преломления (жидкая фаза) — 1,38;
• коэффициент преломления (после частичного высыхания) — до 1,46;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — совместима с большинством стандартных флуорохромов (FITC, TRITC, Cy3, Alexa Fluor и др.);
• дополнительно — рекомендуется герметизация краёв покровного стекла лаком.

Герметизация, обеспечиваемая средой, является полупостоянной: препараты могут храниться при +2…+8 °С в темноте в течение нескольких недель без значительной потери сигнала. При необходимости повторного анализа покровное стекло легко удаляется — достаточно поместить слайд в PBS-буфер до полного растворения среды. Для максимальной долговечности рекомендуется дополнительно обработать края покровного стекла водонепроницаемым лаком, что предотвратит высыхание и проникновение влаги извне.

Благодаря широкой совместимости с основными флуоресцентными метками среда подходит для одно- и многоцветной микроскопии и станет надёжным решением как в исследовательских, так и в диагностических лабораториях.

LumiMount DAPI — это готовая к использованию фиксирующая среда на водной основе, содержащая ядерный краситель DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол). Она предназначена для одновременного окрашивания клеточных ядер и герметизации флуоресцентно меченых цитологических или гистологических препаратов. DAPI избирательно связывается с AT-богатыми участками двухцепочечной ДНК, вызывая более чем 20-кратное усиление синей флуоресценции. Максимумы спектра: поглощение — 358 нм, эмиссия — 461 нм.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• содержит DAPI — да;
• коэффициент преломления (жидкая фаза) — 1,38;
• коэффициент преломления (после частичного высыхания) — до 1,46;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — совместима с большинством стандартных флуорохромов;
• дополнительно — рекомендуется герметизация краёв покровного стекла лаком.

В традиционных протоколах окрашивание ядер и монтирование выполняются раздельно, что увеличивает время подготовки образца и риск повреждения сигнала. Кроме того, без специальных стабилизирующих добавок флуорохромы быстро теряют яркость под микроскопом. Данная среда решает обе задачи за один шаг: обеспечивает чёткую визуализацию ядер и защищает весь флуоресцентный сигнал от фотобелинга благодаря встроенным антифейд-компонентам.

После нанесения среда постепенно концентрируется под покровным стеклом за счёт испарения воды, что приводит к увеличению коэффициента преломления до 1,46 — значения, близкого к оптическим характеристикам стекла. Это улучшает качество изображения при микроскопии. Герметизация считается полупостоянной: препараты можно хранить при +2…+8 °С в темноте в течение нескольких недель. При необходимости покровное стекло легко удаляется путём инкубации слайда в PBS-буфере до полного растворения среды.

Для максимальной долговечности образца рекомендуется дополнительно герметизировать края покровного стекла водонепроницаемым лаком — это предотвратит высыхание и проникновение влаги. Среда совместима с большинством распространённых флуоресцентных меток (FITC, TRITC, Cy3, Alexa Fluor и др.), что делает её универсальным решением для многоцветной микроскопии.

LumiMount Plus — это готовая к применению монтажная среда на водной основе, предназначенная для фиксации и последующей микроскопии флуоресцентно меченых клеточных и тканевых образцов. Благодаря повышенной вязкости состав легко наносится пипеткой, равномерно распределяется под покровным стеклом и минимизирует образование воздушных пузырей, что особенно важно при подготовке высококачественных микропрепаратов.

Основное преимущество данной среды — это способность эффективно подавлять фотобелинг флуорохромов и флуоресцентных белков, что значительно увеличивает временной интервал для проведения микроскопии и документирования результатов. После нанесения среда постепенно теряет влагу, затвердевает и формирует прозрачную матрицу с коэффициентом преломления 1,52, близким к стеклу, что улучшает оптическое разрешение при наблюдении.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• консистенция — вязкая;
• коэффициент преломления (до высыхания) — 1,43;
• коэффициент преломления (после полимеризации) — 1,52;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — не рекомендуется для использования с интеркалирующими ядерными красителями (DAPI, Hoechst и аналогами).

Препараты могут храниться в течение нескольких недель или месяцев при температуре от +2 до +8 °С в темноте. При необходимости покровное стекло можно аккуратно снять — для этого достаточно погрузить слайд в буферный раствор (например, PBS) до полного растворения среды.

Важно отметить, что состав LumiMount Plus не совместим с ДНК-интеркалирующими красителями, такими как DAPI и Hoechst, поскольку может нарушать их связывание с ядерной ДНК или снижать интенсивность флуоресценции. Поэтому для ядерного окрашивания рекомендуется использовать альтернативные монтажные среды, специально разработанные для работы с этими красителями.