Щелочная фосфатаза катализирует отщепление 5’- и 3’-фосфатных групп от ДНК, РНК и нуклеотидов, а также от белков.
Термочувствительная фосфатаза FastAp активна во всех рестриктазных и ПЦР-буферах. Она дефосфорилирует все типы концов ДНК (липкие и тупые) в течение 10 минут при +37оС и инактивируется при +75оС в течение 5 минут, поэтому не требуется очистка реакционной смеси перед лигированием.
Особенности щелочной фосфатазы FastAp:
- Рекомбинантный белок;
-
быстрое дефосфорилирование - 10 минут;
-
быстрая инактивация - 5 минут;
-
можно использовать для одновременного расщепления и дефосфорилирования векторной ДНК;
-
активна во всех рестриктазных и ПЦР-буферах;
-
дефосфорилирует белки;
-
используется для очистки ПЦР-смесей совместно с ExoI.
Области применения:
- Дефосфорилирование векторной ДНК при клонировании;
-
очистка ПЦР-продуктов из реакционных смесей перед секвенированием;
-
дефосфорилировнание 5’-концов ДНК перед мечением полинуклеотидкиназой Т4;
-
другие экперименты, связанные с дефосфорилированием нуклеиновых кислот;
-
дефосфорилирование белков.
Важно!
Связывание фосфатазы с ДНК може приводить к смещению полос в агарозном геле. Во избежание подобного смещения рекомендуется добавлять к электрофорезным образцам буфер для нанесения с SDS и инкубировать образцы в течение 10 минут при +65оС, а затем охладить во льду.
Условия хранения: -20оС
